زمانی که سلول ها را در آنها کشت می دهیم

کارخانه سلولآلوده هستند، رسیدگی به اکثر آنها دشوار است.اگر سلول های آلوده ارزشمند هستند و به سختی به دست می آیند، می توان از روش های زیر برای حذف آنها استفاده کرد.

1. از آنتی بیوتیک استفاده کنید

آنتی بیوتیک ها در کشتن باکتری ها موثرتر هستندکارخانه های سلولی.داروی ترکیبی موثرتر از دارو به تنهایی است.داروی پیشگیرانه موثرتر از دارو بعد از آلودگی است.داروهای پیشگیرانه معمولاً از یک آنتی بیوتیک مضاعف (پنی سیلین 100u/mL به اضافه استرپتومایسین 100μg/mL) استفاده می کنند.پس از آلودگی، روش تمیز کردن باید 5 تا 10 برابر بیشتر از مقدار معمول باشد.دارو باید 24 تا 48 ساعت پس از افزودن استفاده شود و سپس با روال معمول جایگزین شود.مایع کشت.این روش ممکن است در مراحل اولیه آلودگی موثر باشد.علاوه بر پنی سیلین و استرپتومایسین، آنتی بیوتیک های مورد استفاده نیز می تواند شامل جنتامایسین، کانامایسین، پلی میکسین، تتراسایکلین، نیستاتین و غیره باشد. معمولاً 400 تا 800 میکروگرم در میلی لیتر کانامایسین یا 200 میکروگرم در میلی لیتر تتراسایکلین استفاده می شود.این محیط هر 2 تا 3 روز یکبار تعویض می شود و به مدت 1 تا 2 نسل برای درمان منتقل می شود.در سال های اخیر گزارش شده است که آنتی بیوتیک های 4-فلورو، 2-هیدروکسی کینولین (سیپروفلوکساسین، سیپ)، مشتق پلو روموتیلین (مشتق پلو روموتیلین، BM-Cyclin2: BM-1 و مشتق تتراسایکلین (BM-2)) هستند. در کشتن مایکوپلاسما در صورت استفاده به تنهایی یا ترکیبی موثر است.این سه آنتی بیوتیک همگی در محلول های غلیظ 250X در PBS آماده شده و در دمای 20- درجه سانتیگراد برای استفاده بعدی نگهداری می شوند.غلظت مصرف Cip 10 میکروگرم در میلی لیتر، BM-1 10 میکروگرم در میلی لیتر و BM-2 5 میکروگرم در میلی لیتر است.هنگام استفاده ابتدا محیط کشت آلوده را آسپیره کنید، محیط کشت RPMI1640 حاوی BM-1 را اضافه کنید، سپس محیط کشت را پس از 3 روز آسپیره کنید، محیط کشت RPMI1640 حاوی BM-2 را اضافه کنید و به مدت 4 روز و به همین ترتیب به مدت 3 روز متوالی کشت کنید. .دور، تا زمانی که با میکروسکوپ رنگ آمیزی فلورسنت 33258 ثابت شود که مایکوپلاسما از بین رفته است، سپس محیط کشت معمولی برای کشت و عبور 3-4 بار اضافه می شود.

2. عملیات حرارتی

انکوباسیون کشت بافت آلوده در دمای 41 درجه سانتی گراد به مدت 18 ساعت می تواند مایکوپلاسما را از بین ببرد، اما اثرات نامطلوبی بر سلول ها دارد.بنابراین، قبل از درمان باید یک آزمایش مقدماتی انجام شود تا زمان گرمایشی که می‌تواند مایکوپلاسما را به حداکثر برساند و کمترین تأثیر را روی سلول‌ها داشته باشد، بررسی کند.این روش گاهی اوقات غیر قابل اعتماد است.اگر ابتدا با دارو درمان شود و سپس در دمای 41 درجه سانتیگراد گرم شود، تأثیر بهتری خواهد داشت.

3. از سرم اختصاصی مایکوپلاسما استفاده کنید

آلودگی مایکوپلاسما را می توان با سرم ایمنی مایکوپلاسمای خرگوش 5% (تیتر هماگلوتیناسیون 1:320 یا بالاتر) از بین برد.از آنجایی که آنتی بادی اختصاصی می تواند رشد مایکوپلاسما را مهار کند، 11 روز پس از درمان آنتی سرم منفی می شود و 5 ماه بعد منفی می ماند.منفی است.اما این روش دردسرسازتر است و به اندازه استفاده از آنتی بیوتیک راحت و اقتصادی نیست.

4. روش های دیگر

علاوه بر روش های فوق الذکر برای رفع آلودگی، روش های تلقیح و عقیم سازی در حیوانات، روش های فاگوسیتوز ماکروفاژها، روش های افزودن بروموراسیل به آلوده وجود دارد.بطری های فرهنگو سپس تابش نور و روشهای فیلتراسیون و غیره به آنها، اما همه آنها دردسرسازتر و بی اثرتر هستند.بنابراین، هنگامی که آلودگی مایکوپلاسما رخ می دهد، مگر اینکه از ارزش ویژه ای برخوردار باشد، به طور کلی دور انداخته شده و دوباره کشت می شود.

لطفا با Whatsapp & Wechat تماس بگیرید: +86 180 8048 1709